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技術(shù)文章

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造血干細(xì)胞培養(yǎng)基配制人造血干細(xì)胞作為成體干細(xì)胞的重要組成，尤其在胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為造血干細(xì)胞的機(jī)理、CD34和CD45等表面標(biāo)志分子成功篩選、培養(yǎng)條件的優(yōu)化探索中取得了突破性進(jìn)展，這為治療惡性血液疾病、根本緩解血細(xì)胞來源緊張等臨床應(yīng)用提供了可能。本文就人類胚胎干細(xì)胞向造血干細(xì)胞方向分化的研究進(jìn)展作如下綜述，以期為致力于該研究領(lǐng)域工作的科研人員提供一些有益的參考。人體大部分骨頭的中央部門有骨腔,骨腔內(nèi)所含的物質(zhì)即骨髓.骨髓中有一種能起著造血功能的細(xì)胞就叫造血干細(xì)胞.人血中的紅細(xì)胞,血小板,淋...

2015 6-8
常用的融合蛋白分為哪幾類的呢常用的融合蛋白從分子量和用途上來分，一般可分為如下三類：1.小分子量的融合肽：這類標(biāo)簽蛋白只有幾個氨基酸，如polyHis，StrepII-tag，F(xiàn)LAG，c-myc-等，主要用于靶蛋白的純化，也可用于靶蛋白的輔助檢測，且由于分子量很小，幾乎不干涉靶蛋白的結(jié)構(gòu)，活性和功能，一般純化后不用去除標(biāo)簽，非常簡單方便。目前zui常使用的是polyHis標(biāo)簽蛋白，可使用金屬離子親和層析(IMAC)進(jìn)行純化，用梯度濃度咪唑溶液洗脫。當(dāng)靶蛋白為包涵體時，也可在變性條件下純化靶蛋白，容易實...

2015 6-5
華雅干細(xì)胞為你解答ELISA樣本值低于空白值的問題在ELISA實驗中，樣本值低于空白值是一個經(jīng)常性的問題。當(dāng)樣本值較低接近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本的檢測。究其原因，主要在于兩個方面，一方面是誤差，另一方面是基質(zhì)效應(yīng)。下文逐個分析不同影響因素的原理、和解決方案。一、基質(zhì)效應(yīng)分析中，基質(zhì)指的是樣本中被分析物之外的組分，基質(zhì)常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，這些影響和干擾被稱為基質(zhì)效應(yīng)。ELISA試劑盒在開發(fā)過程中，標(biāo)準(zhǔn)品不能采用人或動物血清、血漿作為標(biāo)準(zhǔn)曲線...

2015 5-27
華雅干細(xì)胞為你解答細(xì)胞培養(yǎng)常見問題1、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)品極大的影響。來自不同特種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。2、欲將一般動物細(xì)胞離心下來，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？欲回收動物細(xì)胞，其離心速率一般為300xg（約1，000rpm），5-10分鐘，過高之轉(zhuǎn)速，將造成細(xì)胞死亡。3、冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放放37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其...

2015 5-26
原代細(xì)胞復(fù)蘇的基本操作方法及其常用耗材介紹一、實驗準(zhǔn)備（1）儀器：凈化工作臺、離心機(jī)、恒溫水浴箱、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、液氮冰箱（2）玻璃器皿：吸管（彎頭、直頭）、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、廢液缸（3）塑料器皿：吸頭、槍頭、膠塞、移液管（10ml）、15ml離心管、凍存管（1～2ml）（4）其他物品：微量加樣槍、紅血球計數(shù)板、記號筆、醫(yī)用橡皮膏、移液槍（5）試劑：PBS、小牛血清、培養(yǎng)液、雙抗（青霉素、鏈霉素）、胰蛋白酶（0.08%）二、操作步驟（1）從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并...

2015 5-25
臍血中分離干細(xì)胞-改良HES分離法臍帶血干細(xì)胞改良HES分離法是將傳統(tǒng)的HES分離法進(jìn)行優(yōu)化和改進(jìn)，在后期給予氯化銨將紅細(xì)胞液的體積縮減與分離。詳細(xì)的操作步驟如下:1.確保操作時在無菌的環(huán)境下進(jìn)行，因而需要準(zhǔn)備超凈臺對穿刺部位進(jìn)行消毒；2.然后將6%的HES分別按照臍血血量的1/4加入到采集來的血袋中；3.混合均勻后使用無菌封口膠密封穿刺點(diǎn)，倒置與10℃的低溫環(huán)境中靜置6小時；4.分離好后先將臍血下層的紅細(xì)胞緩慢的放出，取50ml離心管置于其中，然后將血漿放入另一只50ml離心管中；5.把盛有紅細(xì)胞的離心管，...

2015 4-22
HES分離紅細(xì)胞HES分離紅細(xì)胞HES是從支鏈淀粉衍生出來的，是富含淀粉的復(fù)合物，其生理和化學(xué)特性主要由取代級、平均分子量決定。大量實驗表明平均分子量越大對紅細(xì)胞的凝集作用越強(qiáng)，有效提高血細(xì)胞的沉降速度，從而使血細(xì)胞與其它細(xì)胞分離。故而，使用HES沉淀法是一種的細(xì)胞分離方法。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells,MSCs)是指一群可向成骨細(xì)胞、成脂、肪胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、心肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞分化的多潛能組織干細(xì)胞,是在細(xì)胞治療、基因治療中有效發(fā)揮作用的理想工...

2015 4-22
淺談胰酶的配制方法胰酶的配制方法Hanks液是常見的平衡鹽溶液(BSS)之一。D-Hanks液則是無鈣鎂離子的Hanks液。BSS與細(xì)胞生長狀態(tài)下的pH值、滲透壓及無菌狀態(tài)一致，且配方簡單，是組織培養(yǎng)基本用液，常用于配制培養(yǎng)基及其他用液，或洗細(xì)胞等，細(xì)胞在BSS中可生存幾個小時。胰蛋白酶(胰酸)溶液是一種常用的細(xì)胞消化液，原代培養(yǎng)時用于處理組織塊，使細(xì)胞分離下來。傳代時用胰蛋白酶使培養(yǎng)細(xì)胞離開所貼附的培養(yǎng)瓶表面，并分散成單個細(xì)胞。胰蛋白酶主要采自?；蜇i的胰臟，呈白色粉末狀，易潮解，應(yīng)在低溫干燥...

2014 10-29

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